Pues después de pasar el tramo de los exámenes finales, y el inicio del verano, y con motivo del gran Carnaval de Química que está organizando@Luisccqq, y del que quiero formar parte, volvemos a la carga. Desde que acabé las clases estoy colaborando por puro placer en el laboratorio de Biomedicina molecular y celular…
Ando enredando para construirme un termociclador basado en Arduino y una cubeta para electroforesis, y jugar un poco y de paso tratar de enseñar a mi peque como funciona ésto del método científico, así que me viene de perlas. Y el blog me lo guardo en favoritos
#8#9 Encantado, soy el autor. Es cierto que hice esta entrada cuando sabía que me iba a tocar hacer Westerns pero aún no había hecho. Ahora que llevo unas decenas seguro que puedo mejorar la entrada, pero nada que no sepáis ya
Lo de hacer tinción después de la transferencia nunca lo había pensado, aunque sea un rojo de Ponceau rápido que permita ver más o menos algo es una buena idea, miraré de ponerlo en práctica.
#12 Enhorabuena por la entrada! Yo cogí por costumbre teñir con azul Comassie el gel después de la trasferencia y la membrana con Rojo Ponceau (o plata) después de revelar!!! no dejaba nada sin reutilizar, jeje
#1 No hay de qué! Lo he leído y me ha gustado, porque es una técnica muy habitual de un laboratorio de biología molecular, que tiene múltiples usos y que poca gente fuera de este ambiente conoce. Así que, aquí va
Ando enredando para construirme un termociclador basado en Arduino y una cubeta para electroforesis, y jugar un poco y de paso tratar de enseñar a mi peque como funciona ésto del método científico, así que me viene de perlas. Y el blog me lo guardo en favoritos
#2#1 Interesante, pero tiene una parte que habría que aclarar. Si quieres hacer un Western Blot, el paso 4 de tinción del gel con Azul de Coomasie, habría que saltarlo. Ya que si lo tiñes con ese colorante ya no hay vuelta atrás y no puedes transferir la membrana correctamente (que sería el paso 5). En cambio si que se pueden usar otros colorantes más fáciles de eliminar después.
#6 Sí, es cierto. Una vez que fijas ya no hay transferencia. Yo, por ejemplo, siempre tiño el gel después de transferir a la membrana. Tras la transferencia siempre quedan proteínas (bueno, depende de que estés ensayando, claro) y con un poco de suerte puedes ver algo antes de revelar con anticuerpos Esto es solo para impacientes!
Comentarios
#8 #9 Encantado, soy el autor. Es cierto que hice esta entrada cuando sabía que me iba a tocar hacer Westerns pero aún no había hecho. Ahora que llevo unas decenas seguro que puedo mejorar la entrada, pero nada que no sepáis ya
Lo de hacer tinción después de la transferencia nunca lo había pensado, aunque sea un rojo de Ponceau rápido que permita ver más o menos algo es una buena idea, miraré de ponerlo en práctica.
¡Gracias por el tip y por comentar!
#12 Enhorabuena por la entrada! Yo cogí por costumbre teñir con azul Comassie el gel después de la trasferencia y la membrana con Rojo Ponceau (o plata) después de revelar!!! no dejaba nada sin reutilizar, jeje
#4 no te creas
Esperemos que el ELISA dé negativo.
¡Muchas gracias por subirlo aquí!
Muy detallado, gracias
#1 No hay de qué! Lo he leído y me ha gustado, porque es una técnica muy habitual de un laboratorio de biología molecular, que tiene múltiples usos y que poca gente fuera de este ambiente conoce. Así que, aquí va
#2 gracias de nuevo.
Ando enredando para construirme un termociclador basado en Arduino y una cubeta para electroforesis, y jugar un poco y de paso tratar de enseñar a mi peque como funciona ésto del método científico, así que me viene de perlas. Y el blog me lo guardo en favoritos
#3 joer, eres un crack!
#2 #1 Interesante, pero tiene una parte que habría que aclarar. Si quieres hacer un Western Blot, el paso 4 de tinción del gel con Azul de Coomasie, habría que saltarlo. Ya que si lo tiñes con ese colorante ya no hay vuelta atrás y no puedes transferir la membrana correctamente (que sería el paso 5). En cambio si que se pueden usar otros colorantes más fáciles de eliminar después.
#6 Sí, es cierto. Una vez que fijas ya no hay transferencia. Yo, por ejemplo, siempre tiño el gel después de transferir a la membrana. Tras la transferencia siempre quedan proteínas (bueno, depende de que estés ensayando, claro) y con un poco de suerte puedes ver algo antes de revelar con anticuerpos Esto es solo para impacientes!
#7 Interesante, tendré que probarlo. Siempre tiro el gel directamente después de transferir.
#8 Prueba, que muchas veces te llevas una sorpresita jejeje